06 May 成功案例｜芬益安©抑制副溶血性弧菌和大肠杆菌能力更强
摘要
通过平板法和试管法分别测定芬益安、某竞品对副溶血性弧菌的抑菌效果，通过平板法测定芬益安、某竞品对大肠杆菌的抑菌效果，结果发现对于副溶血性弧菌和大肠杆菌，芬益安都表现出比某竞品更强的抑菌能力。
1. 材料与方法
1.1 材料与仪器
1.2 实验方法
1.2.1 样品提取：
某竞品用50%乙醇超声提取30分钟，最终提取液浓度为100g/L。芬益安用纯水稀释至100g/L
1.2.2 菌悬液的制备：
取大肠杆菌，加入灭菌后的脑心浸出液肉汤100ml，于37°C恒温培养箱中活化24小时，吸取1ml活化的菌悬液，在100ml脑心浸出液肉汤中，于37°C恒温培养箱中扩大培养24小时，用平板计数法测定最终菌悬液浓度，用无菌水稀释至1*105cfu/ml备用；取副溶血性弧菌，加入3%氯化钠脑心浸出液肉汤100ml，于37°C恒温培养箱中活化及扩大培养24小时。
1.2.3 平板法测对大肠杆菌的抑菌效果
MH培养基高压灭菌，冷却到80°C左右按照一定比例添加产品，并将产品和培养基混合均匀，使产品最终浓度为0.1g/L, 0.2g/L, 0.5g/L, 1g/L, 2g/L。将不添加任何产品的培养基作为对照组。每个培养皿加入1ml 浓度为105cfu/ml的大肠杆菌菌液，倒入20ml左右培养基（约为45°C）混合均匀。冷却凝固后于37°C恒温培养箱中倒置培养24小时。
1.2.4 平板法测对副溶血性弧菌的抑菌效果
副溶血性弧菌培养基煮沸灭菌，冷却到80°C左右按照一定比例添加产品，并将产品和培养基混合均匀，使产品最终浓度为0.05g/l, 0.1g/l, 0.2g/l, 0.3g/l, 0.5g/l。将不添加任何产品的培养基作为对照组。每个平板加入1ml培养后的副溶血性弧菌菌液，倒入20ml左右培养基（约为45°C）混合均匀。同时通过平板计数的方法测定副溶血性弧菌菌液的浓度。冷却凝固后于37°C恒温培养箱中正置培养24小时。
1.2.5 试管法测对副溶血性弧菌的抑菌效果
通过倍比稀释法测定芬益安和某竞品的最低抑菌浓度，之后对相应浓度进行平板划线测定最低杀菌浓度。配制3%NaCl的脑心浸出液肉汤并灭菌，每只试管分装5ml。将产品提取液用无菌的3%NaCl脑心浸出液肉汤稀释至12.8g/L，对其进行梯度稀释，使产品最终浓度为0.1g/L, 0.2g/L, 0.4g/L, 0.8g/L, 1.6g/L，3.2g/L，6.4g/L。加入100ul副溶血性弧菌菌悬液，充分摇匀，于37°C恒温培养箱中培养24小时。明显抑菌细菌生长（未变浑浊）的最低产品浓度为其最低抑菌浓度。平板划线后无菌落生长的产品浓度为其最低杀菌浓度。
2. 结果分析
2.1 平板法测对大肠杆菌抑菌效果
（图1）从左到右芬益安浓度为0g/l, 0.1g/L, 0.2g/L, 0.5g/L, 1g/L, 2g/L。上下为平行对照。
图1: 平板法测对大肠杆菌抑菌效果-芬益安
（图2）从左到右某竞品浓度为0g/l, 0.1g/L, 0.2g/L, 0.5g/L, 1g/L, 2g/L。上下为平行对照。
图2: 平板法测对大肠杆菌抑菌效果-某竞品
芬益安浓度为2g/L时能完全杀死大肠杆菌，某竞品在2g/L时没有表现出抑菌效果。证明芬益安对大肠杆菌的抑制效果优于某竞品。
2.2 平板法测对副溶血性弧菌的抑菌效果
（图3）从左到右芬益安浓度为0.05g/l, 0.1g/l, 0.2g/l, 0.3g/l, 0.5g/l。上下为平行对照。
图3: 平板法测对副溶血性弧菌的抑菌效果-芬益安
图4: 平板法测对副溶血性弧菌的抑菌效果–某竞品
芬益安浓度为0.05g/l和0.1g/l时表现出一定的抑菌效果，浓度为0.2g/l时几乎完全抑菌。
某竞品浓度为0.05g/l和0.1g/l时表现出一定的抑菌效果，但是浓度为0.05g/l时效果不如芬益安明显，浓度为0.2g/l时几乎完全抑菌。
2.3 试管法和平板划线测定对副溶血性弧菌的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度
平板计数法测得菌悬液的浓度为8*106cfu/ml。
（图5-1）从左到右芬益安浓度为0.1g/L, 0.2g/L, 0.4g/L, 0.8g/L, 1.6g/L，3.2g/L，6.4g/L
图5-1: 芬益安
图5-2: 芬益安
0.8g/L有弧菌生长，1.6g/L、3.2 g/L无弧菌生长，说明芬益安最低抑菌浓度是0.8～1.6g/L，最低杀菌浓度是1.6g/L。
（图6-1）从左到右样品浓度为0.1g/L, 0.2g/L, 0.4g/L, 0.8g/L, 1.6g/L，3.2g/L，6.4g/L。
图6-1: 某竞品
（图6-2）产品浓度为3.2g/L时，试管是澄清的。将0.8g/L、1.6g/L、3.2g/L试管取做平板划线。
图6-2: 某竞品
0.8g/L 、1.6g/L有弧菌生长，3.2g/L无弧菌生长，说明某竞品最低抑菌浓度是1.6～3.2g/L，最低杀菌浓度是3.2g/L。
总结表
从最低抑菌浓度和最低杀菌浓度来看，芬益安对副溶血性弧菌的抑制作用比某竞品更好。
3. 实验结论
本次实验通过平板法和试管法分别测定芬益安、某竞品对副溶血性弧菌的抑菌效果，结果发现，在平板法中，0.05g/L芬益安表现出比某竞品更好的抑菌效果；
试管法和平板划线证明，芬益安的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度都比某竞品更低，说明其抑制副溶血性弧菌的效果更强。
通过平板法测定芬益安、某竞品对大肠杆菌的抑菌效果，芬益安在2g/L时杀菌能力显著高于某竞品。这些实验证明了对于副溶血性弧菌和大肠杆菌，芬益安都表现出比某竞品更强的抑菌效果。
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