芬乐酸©及两种竞品抑菌和杀菌作用的体外实验
实验基础设计 本实验使用稀释中和方法,该方法基于欧洲官方的EN 1040:2005“化学消毒剂和防腐剂-定量悬浮试验,用于评估化学消毒剂和防腐剂的基本杀菌活性”。 该方法的基本原理如下: 为了估计消毒剂或抗菌剂的抗菌活性,将所测试化合物的稀释液与细菌悬液混合,并在培养一段时间后,检测剩余细菌的生长能力。 对于弱酸,实验证实若不使用中和剂,其体外抗菌活性可能会被高估。原因是弱酸通过两种机制作用于细菌: 1.通过降低环境pH值产生酸性应激。 2.未解离的弱酸通过细菌细胞膜扩散,然后在细胞内解离,这会使细胞环境酸化并破坏细菌细胞代谢。 当使用弱酸作为抗菌剂或消毒剂时,通过降低环境pH值而产生抗菌作用(作用机理1),作用效果会根据酸的使用环境的不同而变化。 例如,当将一样多的弱酸添加于家禽场的饮用水中时,饮用水的最终pH值将取决于水的初始pH值和硬度。 由于动物每个消化器官中的pH值都不同,当弱酸经过动物消化系统时,也会发生同样的情况。 出于此原因,体外实验中应更关注于作用机理2产生的效果,即弱酸穿透细菌细胞壁并破坏其代谢的能力。 通过添加中和剂,使体系中同时存在缓冲蛋白胨水和磷酸氢二钠,使得通过机理1产生作用的抗菌活性被停止或大大减弱,体外试验检测抗菌活性时主要检测的是通过作用机理2产生的效果。 实验材料 缓冲蛋白胨水 (BPW) MH琼脂 ATCC 14028沙门氏菌菌株 ATCC 25923大肠杆菌菌株 磷酸氢二钠 测试产品:芬乐酸©,竞品A,竞品B 试管、培养皿 实验步骤 将测试产品芬乐酸,竞品A,竞品B用水稀释至5%。 配制缓冲蛋白胨水并灭菌,分装至 3*8*2 支试管中,每管8ml。 加入8ml稀释后的产品溶液至每组试管的第一支试管中,并进行梯度稀释。最终每支试管中产品浓度如下: 每支试管中加入1ml 0.015 mol / L磷酸氢二钠溶液,混合均匀后静置5分钟。 每支试管中加入1ml 103 CFU/ml沙门氏菌液或103 CFU/ml大肠杆菌液。 37℃下培养24小时。 最低抑菌浓度(MIC):培养完成后,观察试管混浊情况,未变混浊的试管中的最低产品浓度即为该产品的最低抑菌浓度。最低抑菌浓度(MIC)定义为具有抑菌作用(防止细菌可见生长)的抗菌成分或试剂能够抑制细菌生长的最低浓度。 最低杀菌浓度(MBC):取1ml培养液于培养皿中,加入15mlMH琼脂,37℃培养48小时,观察菌落生长情况,无菌落生长的平板中的最低产品浓度即为该产品的最低杀菌浓度。 最低杀菌浓度(MBC)是杀菌剂在特定条件下,在一段固定的,可适当延长的时间内杀死细菌所需的最低浓度。可以通过将MIC测试的肉汤稀释液培养至不含测试试剂的琼脂平板中来确定。通过确定可降低初始细菌接种物活力达预定降低率(例如≥99.9%)的最低杀菌剂浓度来确定最低杀菌浓度(MBC)。MBC是MIC的补充;MIC测试显示的抗菌剂能极大抑制生长的最低水平,而MBC显示的是抗菌剂会导致微生物死亡的最低水平。 换句话说,如果MIC表现出抑制作用,但其不会引起微生物死亡,因此将培养液接种到琼脂上可能仍会导致微生物增殖。若MBC不超过MIC的四倍,则通常认为该抗菌剂具有杀菌作用。 结果 芬乐酸©及两种竞品抑菌和杀菌作用的体外实验 产品推荐剂量 芬乐酸©:每升水中添加0.5-1 ml 竞品A:每升水中添加1.5-2ml 竞品B:每升水中添加1-2ml 结论 在确定这三种产品的抑菌效果(最低抑菌浓度,MIC)时,我们发现所有产品对沙门氏菌的MIC相同,而芬乐酸©对大肠杆菌的MIC最低,其次是竞品A和竞品 B. 在确定三种产品的抗菌效果(最低杀菌浓度,MBC)时,我们发现所有产品对沙门氏菌的MBC相同,而芬乐酸©和竞争产品A对大肠杆菌的MBC最低。 可以得出结论,“体外”实验芬乐酸©对沙门氏菌和大肠杆菌最有效。 该试验证明芬乐酸©针对沙门氏菌和大肠杆菌的MIC和MBC在0.39 ml / L至0.78 ml / L之间,其在推荐的商业剂量(每升饮用水中添加0.5-1 ml)下可作为有效的水消毒剂。 与竞品A和B相比,其较低的推荐剂量是芬乐酸©的另一个竞争优势。
普维动物保健品有限公司, 动物饲料添加剂, 植物提取物, 植物生物素, 精油, PFA, 植物性饲料添加剂, 植物学, 植物性饲料添加剂, 新型促生长剂, 植物素, 替代抗生素促生长剂, 天然产品, 肠道健康, PlusVet Animal Health,养鸡,普维生,普乐壮,饲料添加剂,无抗养殖,植物提取物替代抗生素,芬乐酸
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芬乐酸©及两种竞品抑菌和杀菌作用的体外实验

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实验基础设计

本实验使用稀释中和方法,该方法基于欧洲官方的EN 1040:2005“化学消毒剂和防腐剂-定量悬浮试验,用于评估化学消毒剂和防腐剂的基本杀菌活性”。

该方法的基本原理如下:

为了估计消毒剂或抗菌剂的抗菌活性,将所测试化合物的稀释液与细菌悬液混合,并在培养一段时间后,检测剩余细菌的生长能力。

对于弱酸,实验证实若不使用中和剂,其体外抗菌活性可能会被高估。原因是弱酸通过两种机制作用于细菌:

  1. 通过降低环境pH值产生酸性应激
  2. 未解离的弱酸通过细菌细胞膜扩散,然后在细胞内解离,这会使细胞环境酸化并破坏细菌细胞代谢。

当使用弱酸作为抗菌剂或消毒剂时,通过降低环境pH值而产生抗菌作用(作用机理1),作用效果会根据酸的使用环境的不同而变化。 例如,当将一样多的弱酸添加于家禽场的饮用水中时,饮用水的最终pH值将取决于水的初始pH值和硬度。 由于动物每个消化器官中的pH值都不同,当弱酸经过动物消化系统时,也会发生同样的情况。

出于此原因,体外实验中应更关注于作用机理2产生的效果,即弱酸穿透细菌细胞壁并破坏其代谢的能力。

通过添加中和剂,使体系中同时存在缓冲蛋白胨水和磷酸氢二钠,使得通过机理1产生作用的抗菌活性被停止或大大减弱,体外试验检测抗菌活性时主要检测的是通过作用机理2产生的效果。

实验材料

  • 缓冲蛋白胨水 (BPW)
  • MH琼脂
  • ATCC 14028沙门氏菌菌株
  • ATCC 25923大肠杆菌菌株
  • 磷酸氢二钠
  • 测试产品:芬乐酸©,竞品A,竞品B
  • 试管、培养皿

实验步骤

  • 将测试产品芬乐酸,竞品A,竞品B用水稀释至5%。
  • 配制缓冲蛋白胨水并灭菌,分装至 3*8*2 支试管中,每管8ml。
  • 加入8ml稀释后的产品溶液至每组试管的第一支试管中,并进行梯度稀释。最终每支试管中产品浓度如下:
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  • 每支试管中加入1ml 0.015 mol / L磷酸氢二钠溶液,混合均匀后静置5分钟。
  • 每支试管中加入1ml 103 CFU/ml沙门氏菌液或103 CFU/ml大肠杆菌液。
  • 37℃下培养24小时。
  • 最低抑菌浓度(MIC):培养完成后,观察试管混浊情况,未变混浊的试管中的最低产品浓度即为该产品的最低抑菌浓度。最低抑菌浓度(MIC)定义为具有抑菌作用(防止细菌可见生长)的抗菌成分或试剂能够抑制细菌生长的最低浓度。
  • 最低杀菌浓度(MBC):取1ml培养液于培养皿中,加入15mlMH琼脂,37℃培养48小时,观察菌落生长情况,无菌落生长的平板中的最低产品浓度即为该产品的最低杀菌浓度。
  • 最低杀菌浓度(MBC)是杀菌剂在特定条件下,在一段固定的,可适当延长的时间内杀死细菌所需的最低浓度。可以通过将MIC测试的肉汤稀释液培养至不含测试试剂的琼脂平板中来确定。通过确定可降低初始细菌接种物活力达预定降低率(例如≥99.9%)的最低杀菌剂浓度来确定最低杀菌浓度(MBC)。MBC是MIC的补充;MIC测试显示的抗菌剂能极大抑制生长的最低水平,而MBC显示的是抗菌剂会导致微生物死亡的最低水平。 换句话说,如果MIC表现出抑制作用,但其不会引起微生物死亡,因此将培养液接种到琼脂上可能仍会导致微生物增殖。若MBC不超过MIC的四倍,则通常认为该抗菌剂具有杀菌作用。

结果

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产品推荐剂量

  • 芬乐酸©每升水中添加0.5-1 ml
  • 竞品A:每升水中添加1.5-2ml
  • 竞品B:每升水中添加1-2ml

结论

在确定这三种产品的抑菌效果(最低抑菌浓度,MIC)时,我们发现所有产品对沙门氏菌的MIC相同,而芬乐酸©对大肠杆菌的MIC最低,其次是竞品A和竞品 B.

在确定三种产品的抗菌效果(最低杀菌浓度,MBC)时,我们发现所有产品对沙门氏菌的MBC相同,而芬乐酸©和竞争产品A对大肠杆菌的MBC最低。

可以得出结论,“体外”实验芬乐酸©对沙门氏菌和大肠杆菌最有效。

该试验证明芬乐酸©针对沙门氏菌和大肠杆菌的MIC和MBC在0.39 ml / L至0.78 ml / L之间,其在推荐的商业剂量(每升饮用水中添加0.5-1 ml)下可作为有效的水消毒剂

与竞品A和B相比,其较低的推荐剂量是芬乐酸©的另一个竞争优势。

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